Quox1是一個同源盒基因,參與動物,真菌和植物的發育模式(形態發生)規律,最初是從五週鵪鶉胚胎的cDNA文庫中分離出來的。它是hox家族中唯一一個在中樞神經和周圍神經細胞的 differentiation 參與的前腦和中腦表達的基因。SAAB於2004年確定了Quox1或其哺乳動物同源物的最佳 DNA 結合位點。用 EcoRV 和XhoI 消化了從人類胚胎cDNA文庫的 PCR 擴增獲得的Quox1 DNA 片段。 SmaI PCR EcoRV SmaI 表達載體pGEMEXxBal形式的XhoI限制位點。將重組質粒轉化到感受態 Escherichia 大腸桿菌BL21菌株中,並通過色譜技術分離Quox1融合蛋白。
將放射性標記的探針與25 pmol純化的Quox1同源結構域融合蛋白在EMSA結合緩衝液中孵育。通過放射自顯影檢測結合了蛋白質的 DNA ,並從凝膠上切下代表蛋白質-DNA複合物的條帶,並使用與20 bp非隨機側翼序列互補的引物通過 PCR 擴增洗脫的 DNA 。在進行5組相同的步驟後,將純化的 DNA 克隆到pMD 18T中並測序。最後串聯 PCR DNA CAATC被確定為Quox1同源域的共識綁定串聯。
圖片259A | 示例性染料終止劑開始的視圖 洛里斯(Loris)/ Public domain | Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Sanger_sequencing_read_display.png) from Wikimedia Commons
مؤلف : Yavor Mendel
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