連接酶鏈反應

的 ligase 鍊式反應(LCR)是的動作 DNA 擴增。的 ligase 鍊式反應(LCR)是放大動作,從不同 PCR 中,它涉及熱穩定的 ligase 連接兩個探針或另一個分子一起然後可以通過標準進行擴增 PCR 循環(巴拉尼, 1991)。每個循環導致目標核酸分子加倍。與 PCR 相比,LCR的一個關鍵優勢是特異性更高。因此,LCR需要兩種完全不同的酶才能正常運行: ligase ,將探針分子連接在一起,然後用熱穩定的聚合酶(例如Taq聚合酶)擴增參與成功連接的分子。設計涉及連接的探針,以使一個探針的5'末端直接與另一探針的3'末端相鄰,從而為 ligase 提供必要的3'-OH和5'-PO4基團底物。

LCR最初是為了發現點突變而開發的。防止連接所需要的只是兩個探針分子交界處的單個鹼基錯配。通過直接在寡核苷酸探針的Tm處進行連接,將只容許完全匹配的引物:模板雙鏈體。此外,LCR可用於擴增已成功連接的模板分子,以評估連接效果並產生比 PCR 更高特異性的大量產物。不可避免地,LCR不一定是 PCR 的替代方案,而是一種補充。

目標條件

它已被廣泛用於檢測單鹼基突變,如遺傳疾病。

圖片092A | 9.製備Kodecytes / kodevirions。只需將細胞/病毒粒子與FSL溶液(包含1個或多個FSL)混合,並在37°C(或低至4°C的溫度)下孵育10–120分鐘。該構建體將自發地併入膜中,並且不需要任何步驟。| Xiphiaz / CC BY-SA(https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)| Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons

圖片092A | 9.製備Kodecytes / kodevirions。只需將細胞/病毒粒子與FSL溶液(包含1個或多個FSL)混合,並在37°C(或低至4°C的溫度)下孵育10–120分鐘。該構建體將自發地併入膜中,並且不需要任何步驟。| Xiphiaz / CC BY-SA(https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)| Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Preparation_of_kodecytes_and_kodevirions.svg) from Wikimedia Commons

مؤلف : John Kaisermann

المراجع:

تقنيات البيولوجيا الجزيئية II

تقنيات البيولوجيا الجزيئية IV

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