在DN2階段（CD44 +CD25 +），細胞上調重組基因RAG1和RAG2並重新排列 TCRβ locus ，將VDJ和恆定區基因組合在一起，以嘗試創建功能性 TCRβ 鏈。隨著發育中的胸腺細胞發展到DN3期（CD44 -CD25 +），T細胞在 TCRβ 旁表達不變的α鏈，稱為pre-Tα。 TCRβ 基因。如果重排的β鏈與不變的α鏈成功配對，則產生的信號會終止β鏈的重排（並使其他等位基因沉默）。儘管事實上這些信號在細胞表面需要該pre-TCR，但它們不依賴於配體與pre-TCR的結合。如果預TCR形式，則該細胞下調CD25和被稱為DN4細胞（CD25 -CD44 -）。然後這些細胞經歷一輪增殖並開始重新排列 TCRα locus 。
正選擇
雙陽性胸腺細胞（CD4 +/ CD8 +）深入胸腺皮質，並在其中帶有自身抗原。這些自身抗原由皮質上皮細胞表面的MHC分子上的胸腺皮質上皮細胞表達。只有那些與MHC-I或MHC-II相互作用的胸腺細胞才會收到重要的"生存信號"。所有無法（如果它們之間相互作用不夠強烈）的人都會因"被忽視而死"（沒有生存信號）而死亡。該方法確保所選的T細胞具有MHC親和力，可以在體內發揮有用的功能（即，細胞必須能夠與MHC和肽複合物相互作用以產生免疫反應）。在這種方法中，絕大多數發育中的胸腺細胞會死亡。積極選擇的方法需要幾天的時間。
圖像464A | 來自健康供體免疫系統的人T淋巴細胞（也稱為T細胞）的掃描電子顯微照片。圖片來源：NIAID | NIAID / NIH / Public domain | Page URL ：來自Wikimedia Commons的（https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Healthy_Human_T_Cell.jpg）
作者 : Russom Kilsen
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