在 Streptamer 技術

的 Streptamer 染色原理結合了由MHC多聚體T細胞分離的經典動作 Strep-tag /鏈黴素-Tactin技術。的 Strep-tag 是一種短肽級聯thatdisplays中度用於突變的鏈黴親和分子的生物素結合位點,稱為鏈球菌-Tactin的結合親和力。對於 Streptamer 技術,Strep-Tactin分子被多聚化並形成"骨架",不可避免地創建了一個平台,用於結合帶strep標記的蛋白。此外,鏈球菌-肌動蛋白骨架具有熒光標記,可進行流式細胞術檢查。將MHC-Strep-tag融合蛋白與Strep-Tactin主鏈一起孵育會形成MHC-多聚體,它能夠對T細胞進行抗原特異性染色。

可逆染色

因為d-生物素分子對Strep-Tactin的親和力比 Strep-tag 高,所以它可以有效競爭結合位點。結論是,在相對較低濃度的d-生物素存在下,基於 Strep-tag 與鏈球菌-肌動蛋白相互作用的MHC多聚體很容易被破壞。如果沒有Strep-Tactin骨架,由於結合親和力弱,單個MHC-Strep-tag融合蛋白會自發地從T細胞的TCR分離(單體MHC-表位複合物不能提供穩定的結合,請參見上文)。

圖片273A | 帶有一疊的托盤,其頂部為自重,紙巾,硝化纖維素或尼龍膜,凝膠,鹽溶液和一塊玻璃板。| Thomasione / Public domain | Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aufbau_Southern-Blot.jpg) from Wikimedia Commons

圖片273A | 帶有一疊的托盤,其頂部為自重,紙巾,硝化纖維素或尼龍膜,凝膠,鹽溶液和一塊玻璃板。| Thomasione / Public domain | Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Aufbau_Southern-Blot.jpg) from Wikimedia Commons

مؤلف : Yavor Mendel

المراجع:

تقنيات البيولوجيا الجزيئية II

تقنيات البيولوجيا الجزيئية VI

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