實例案例:細菌質粒 subcloning

在這個例子中,來自哺乳動物基因庫的基因將被亞克隆到細菌質粒(目的平台)中。細菌質粒是一塊環狀的 DNA ,其中包含調控元件,如果將其放置在質粒中的正確位置,該調控元件可使細菌產生基因產物(基因表達)。生產位點的兩側是兩個限制性酶切位點" A"和" B",其粘性末端不兼容。

哺乳動物 DNA 沒有這些限制位點,因此它們是由重疊延伸 PCR 內置的。設計引物時要小心放置限制位點,以使蛋白質的編碼符合讀框,並且在蛋白質的任一側均植入最少的額外氨基酸。

包含具有新的限制性位點的哺乳動物基因的 PCR 產物和目的質粒都經過限制性消化,並且消化產物通過 gel electrophoresis 純化。

圖片274A | 此圖像如左圖所示,描繪了 subcloning 的進行過程。| 最初的上傳者是英語維基百科的Takometer。/ Attribution 2.5 Generic | Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons

圖片274A | 此圖像如左圖所示,描繪了 subcloning 的進行過程。| 最初的上傳者是英語維基百科的Takometer。/ Attribution 2.5 Generic | Page URL :(https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Subcloning.png) from Wikimedia Commons

مؤلف : Yavor Mendel

المراجع:

تقنيات البيولوجيا الجزيئية II

تقنيات البيولوجيا الجزيئية VI

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